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方法:
一.濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定
方法及其衡量的標(biāo)準(zhǔn):用高精度紫外可見分光光度計(jì)(波長(zhǎng)精度±0.3nm)對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描,檢測(cè)值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長(zhǎng)精度,其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好,波長(zhǎng)精度越高。
二.靈敏度和準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)
方法:①靈敏度:精確配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中,以0.05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(參比波長(zhǎng)650nm)測(cè)定,其吸光度應(yīng)≥0.01A。②準(zhǔn)確度:準(zhǔn)確配制:1mmo/L對(duì)硝基苯酚(提純品)水溶液,然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之,加入200ul稀釋液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(參比波長(zhǎng)650nm)檢測(cè),其吸光度應(yīng)在0.4A(0.395~0.408A)左右。
三.通道差與孔間差檢測(cè)
方法及其表達(dá)方式:①通道差檢測(cè):取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染)以酶標(biāo)板架作載體,分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm,參比波長(zhǎng)630或650nm,以下均相同)連續(xù)測(cè)三次,觀察其不同通道之間測(cè)量結(jié)果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。②孔間差的測(cè)量:選擇同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065~0.070A)先后置于同一通道,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長(zhǎng)檢測(cè),其誤差大小用±1.96s衡量。
四.零點(diǎn)飄移
方法:取八只小孔杯,分別置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置,均加入200ul蒸餾水并調(diào)零,采用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)(490nm)每隔30min測(cè)定一次,觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化。其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。
五.精密度評(píng)價(jià)
方法及評(píng)價(jià)指標(biāo):每個(gè)通道三只小杯,分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液,蒸餾水調(diào)零,采用雙波長(zhǎng)作雙份平行測(cè)定,每日測(cè)定兩次,連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
六.線性測(cè)定
方法:精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液,采用雙波長(zhǎng)平行檢測(cè)8次求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x,并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測(cè)量范圍。
七.雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià)
方法:在運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品時(shí),由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等,這些都是儀器測(cè)定過程中常見的干擾因素,而標(biāo)本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對(duì)測(cè)定結(jié)果影響則較小,因此我們將文獻(xiàn)中的雙被長(zhǎng)評(píng)價(jià)方法改為:取同一廠、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065~0.070A)先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)(490nm)和雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630/650nm)進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)清除干擾因素的效果。